Ин ситу хибридизација

Тхе ин ситу хибридизација је метода за откривање хромозомске аберације. Одређени хромозоми су обележени флуоресцентним бојама и везани за ДНК сонду. Ова техника се користи за пренаталну дијагнозу генских мутација.

Шта је ин ситу хибридизација?

У случају хибридизације ин ситу или Флуоресценција ин ситу хибридизација нуклеинске киселине из РНА или ДНК откривају се у одређеним ткивима или ћелији молекуларно-генетским методама. Обично се ова врста дијагнозе користи за откривање структурне или нумеричке хромозомске неправилности током трудноће.

У ту сврху користи се вештачки произведена сонда која се сама састоји од нуклеинске киселине. Потом се везује за нуклеинске киселине у организму помоћу упаривања база. Ова веза се подразумева под називом хибридизација. Докази се заснивају на живој структури пацијента и стога одговарају ин-ситу доказима. То треба разликовати од ин витро метода у којима се откривање врши у епрувети. Методу су у 20. веку развили научници Јое Галл и Мари Лоу Пардуе.

Технологија се од тада развијала. Док су се у то време користиле радиоактивне сонде, на пример, данас се користе флуоресцентне сонде са ковалентном везом за молекуле маркера.

Функција, ефекат и циљеви

Ин-ситу хибридизација се обично користи за откривање хромосомских аберација, тј. Хромосомских аномалија које се не могу открити у кариограму. То значи да се метода увек користи када се наследне болести одређују током трудноће.

Пошто су аберације хромозома проблем који данас не би требало потценити, употреба методе се временом повећава. Хибридизација се одвија на основу нативних ћелија из мајчине амнионске течности. Основа технологије је везивање сонде обележене бојом на деловима ДНК. Захваљујући везивању, број примерака може се касније проценити микроскопом, јер појединачне копије емитују светлосни сигнал и на тај начин могу бити видљиве под микроскопом. Постоје различити поступци. Или се анализа одвија одмах након везивања.

У овом случају се користи флуоресцентна боја попут биотина која се директно везује за ДНК сонду. Помоћу индиректне методе ин ситу хибридизације процена се не може извршити одмах након хибридизације, јер се флуоресцентне материје могу везати за сонду тек након хибридизације. Ова индиректна метода се користи чешће од директне јер се верује да је осетљивија. Поред центрометарских ДНК сонди специфичних за хромозом, постоје и ДНК сонде специфичне за локус, ДНК библиотеке специфичне за хромосоме и упоредне хибридизације генома.

Центрометрске ДНК сонде специфичне за хромосоме могу се користити за откривање хромосомски нумеричких аномалија. То значи да се они углавном користе када постоји сумња на дуплиране или избрисане хромозоме. ДНК сонде специфичне за локацију посебно су погодне за откривање минималних мутација које се не могу открити у кариограму. Хромосомска сонда специфична за библиотеку ДНК користи се посебно за откривање уметања и транслокација.

Упоредна хибридизација генома, с друге стране, је свеобухватна анализа губитака и добитака хромозомског материјала. Данас је ин ситу хибридизација веома важна у дијагнози различитих мутација хромозома.У дијагностици Довновог синдрома, на пример, сонде се везују за хромозом 21. У ту сврху се обично користе сонде специфичне за хромозоме, које се могу користити ако се сумња на ову болест.

Сумња може настати, на пример, ако су родитељи раније родили дете са том болешћу и слика ултразвука је ненормална. Ако уместо двоструке везе постоји трострука веза и тако се емитује сигнал троструког боја, дијагноза се сматра потврђеном.

Ризици, нуспојаве и опасности

За разлику од, на пример, ПЦР, ин ситу хибридизација је значајно мање подложна контаминацији. Поред тога, време потребно за поступак неизмерно је мање. Међутим, будући да ембриони посебно формирају узорке хромозома, образац се не може користити са сигурношћу да би се одредио остатак хромозомске дистрибуције, а самим тим и генетски статус осталих ћелија.

Сигнали у боји се такође могу преклапати или остати невидљиви из других разлога. Као резултат, ин ситу хибридизација као дијагностички алат релативно је склона грешкама током трудноће. Погрешне дијагнозе могу настати и родитељи се могу одлучити против здравог ембриона. Да би се смањила осетљивост на грешке ин ситу хибридизације, потребно је истовремено прегледати најмање две ембрионалне ћелије. Испитивањем две ћелије паралелно, сада постоји само занемарљив ризик од погрешне дијагнозе.

У таквом случају родитељи се апсолутно могу ослонити на дијагнозу. Ин-ситу хибридизација се не нуди свакој трудници, већ само женама из ризичне групе. Ипак, трудницама није ускраћена ова дијагноза на сопствени захтев. Ненормални ултразвучни налази или абнормални серум могу навести лекара да понуди дијагностичку процедуру. Иако се велики део хромозомских аберација, али никако не све, може дијагностиковати употребом ин ситу хибридизације.

Стога се ин-ситу хибридизација никада не сме изводити сама, већ се увек мора користити заједно са конвенционалним тестом хромозома. Брига о трудници игра велику улогу у овом поступку. Пре анализе постоји добро основана расправа са будућом мајком о дијагностичкој методи, која објашњава ризике, могућности и границе технологије.